HPLC测定增液承气口服液中梓醇含量

   阅文网   2020-07-28 00:00:00

  摘要:目的 建立增液承气口服液中梓醇的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为eclipse xdb c18(150 mm×4.6 mm,5 m),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99),检测波长为210 nm,柱温为30 ℃,流速为1.0 ml/min。结果 梓醇对照品进样量在0.052~0.258 g(r=0.999 9)范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.23%(rsd=0.76%,n=9)。结论 所建立的定量方法准确、重复性好、专属性强,可作为控制和评价本品质量的方法。
  关键词:增液承气口服液;梓醇;高效液相色谱法;含量测定
  增液承气口服液为增液承气汤的基础上创制而成,由地黄、玄参、麦冬、大黄4味中药组成。增液承气汤出自清代医家吴鞠通《温病条辨·中焦篇》,具有甘凉濡润、滋阴增液、软坚降泄、通腑泄热之功效,用于治疗温病阳明腑实兼阴液亏损之证。临床上主要用于治疗中老年习惯性便秘、阴虚肠燥便秘证、慢性呼吸衰竭、慢性支气管炎急性发作、流行性出血热少尿期等。随着增液承气汤在临床上的广泛应用,为便于患者服用和携带方便,将其研制开发为增液承气口服液。地黄和玄参为君药,其主要有效成分梓醇为环烯醚萜苷类化合物,具有神经保护、抗老年性痴呆、抗炎、利尿等药理作用[1],与增液承气口服液主要药理作用相吻合,因此,有必要对梓醇进行含量控制,从而控制药品质量,保证疗效。
  1 仪器与试药
  agilent1100高效液相色谱仪,包括g1311a四元泵、g1314a vwd检测器、agilent1100化学工作站(美国agilent仪器公司);metler-d2025型十万分之一电子天平(梅特勒仪器上海公司);dzf-6020型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);kh-250db型数控超声波提取器(昆山禾创超声仪器有限公司,input:90 w;output:80 w;freq:56 khz);hhs-24型电热恒温水浴锅(江苏大地自动化仪器厂)。
  梓醇对照品(中国药品生物制品检定所,批号110808-200508),乙腈、甲醇(色谱纯,山东禹王实业有限责任公司),水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。增液承气口服液样品(甘肃省张掖市人民医院,批号20120101、20120502、20120702、20120902、20121202)。
  2 方法与结果
  2.1 色谱条件
  eclipse xdb c18柱(pn 993967-902,4.6 mm×150 mm,5 m);检测波长:210 nm;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99);流速:1.0 ml/min;柱温:30 ℃;进样量:10 l;理论板数按梓醇峰计算应不低于3000;外标法定量。
  2.2 对照品溶液的制备
  精密称取置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h的梓醇对照品6.46 mg,置50 ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,超声处理(80 w,56 khz)10 min,放至室温;精密吸取上述溶液5 ml,置50 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液(每1 ml含梓醇12.92 g)。
  2.3 供试品溶液的制备
  精密量取样品口服液5 ml,浓缩至近干,残渣用流动相溶解,转移至50 ml量瓶中,并用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
  2.4 阴性对照溶液的制备
  按处方制备工艺制成缺玄参和地黄的阴性供试品,按供试品溶液的制备方法项下方法制得阴性对照溶液。
  2.5 专属性试验
  分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 l,注入液相色谱仪,结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,有相同保留时间(5.72 min)的色谱峰,阴性试验无干扰,证明本方法可行,见图1。
  2.6 线性关系考察
  精密吸取上述对照品溶液4.0、8.0、12.0、16.0、20.0 l,注入液相色谱仪,测定梓醇对照品的峰面积值。以对照品进样量(g)为横坐标,以峰面积值(area)为纵坐标进行线性回归,梓醇的回归方程为:y=235.340x-0.057,r=0.999 9。结果表明,梓醇对照品进样量在0.052~0.258 g时,与峰面积值具有良好的线性关系。
  2.7 精密度试验
  精密吸取同一浓度对照品溶液,按"2.1"项下色谱条件,重复进样6次,进样量10 l,记录色谱图,结果梓醇峰面积rsd=0.56%,表明本方法的精密度良好。
  2.8 稳定性实验
  取上述供试品溶液,分别于0、2、4、6、8 h进样10 l,按"2.1"项下色谱条件测定,结果梓醇峰面积rsd=1.10%。结果表明,梓醇含量在8 h 内基本稳定。
  2.9 重复性试验
  分别精密称取同一样品(批号20120902),共6份。按样品含量测定方法测定,结果梓醇峰面积rsd=1.35%,说明本方法的重复性良好。
  2.11 样品测定
  取5批样品,分别按"2.3"项下方法制备供试品溶液。取对照品溶液、供试品溶液,经0.45 m针筒过滤器过滤,精密吸取10 l进样,按外标法计算样品中梓醇的含量,结果见表2。
  3 讨论
  在色谱条件选择中,紫外扫描中,梓醇对照品溶液在190~400 nm 的最大吸收在210 nm,与药典相同[2]。在确定色谱分离条件时,对甲醇、乙腈、不同浓度的磷酸溶液等不同流动相不同比例进行多次选择比较,结果当乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)时,分离效果好且分离时间短,理论板数按梓醇峰计算不低于3000,并参考文献[3]确定本试验的检测条件,梓醇能够达到基线分离,峰形好,保留时间相对适中,分离度较好,柱压明显降低,其他成分无干扰。
  测定结果表明,5批增液承气口服液中梓醇含量差异较大,这可能和原料的质量和生产工艺有关。根据单味药地黄和玄参中梓醇的含量限度,结合本药品中地黄和玄参所加量和制剂工艺中梓醇的平均转移率,建议本品梓醇的含量限度为:本品每1 ml含地黄和玄参以梓醇(c15h22o10)计,不得少于0.45 mg。
  hplc测定梓醇的报道很多[3-4],本试验建立的含量测定方法专属性强,检测可排除其他非测定物质的干扰,测定结果准确,相关性好,为增液承气口服液的质量控制提供了依据。同时,可为含有相同药材的中药复方制剂定性定量方法的确定提供参考。
  参考文献:
  [1] 李军,张丽萍,张震凌.地黄的研究进展[j].河南中医学院学报,2005, 20(6):79-83.
  [2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[s].北京:中国医药科技出版社,2010:115-116.
  [3] 郝武常,朱宇红,朱志峰,等.炮制对地黄中梓醇含量的影响[j].中国中药杂志,1997,22(6):3451-3454.
  [4] 和健,王建国.hplc法测定清消颗粒中梓醇的含量测定[j].中国中药杂志,2003,28(9):883-885.


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