黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠血糖、腹主动脉血管内皮形态及缺氧诱导因子—1α的影响

   阅文网   2020-07-28 00:00:00

  摘要:目的 观察黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠空腹血糖(fbg)、空腹胰岛素(fins)及腹主动脉血管内皮形态、缺氧诱导因子-1α(hif-1α)表达的影响,并探讨其作用机制。方法 采用小剂量链脲佐菌素腹腔注射联合高糖高脂饲料喂养wistar大鼠,建立2型糖尿病模型。随机将大鼠分为空白组、模型组、对照组和治疗组。空白组、模型组灌服生理盐水,对照组灌胃二甲双胍,治疗组灌胃黄连解毒汤。6周后检测fbg、fins,采用免疫组织化学法测定腹主动脉hif-1α表达,he染色法观察腹主动脉血管内皮形态变化。结果 与模型组、对照组比较,治疗组腹主动脉hif-1α表达、fbg均明显降低(p<0.01),fins明显升高(p<0.01),腹主动脉血管内皮细胞的损伤得到明显改善。结论 黄连解毒汤对损伤的血管内皮细胞有保护作用,其机制可能是通过抑制hif-1α表达实现的。
  关键词:黄连解毒汤;2型糖尿病大鼠;腹主动脉;血管内皮形态;缺氧诱导因子-1α;空腹血糖;空腹胰岛素
  黄连解毒汤原方见于《外台秘要》引崔氏方,由黄连、黄芩、黄柏、栀子组成,功用泻火解毒,主治三焦火毒证。方中诸药皆为大苦大寒之品,故黄连解毒汤被历代医家视为清热解毒经典方。现代药理研究表明,2型糖尿病(t2dm)大鼠视网膜及肾组织中均能检测到缺氧诱导因子-1α(hif-1α)的表达[1-2]。本实验主要研究t2dm大鼠腹主动脉hif-1α的表达情况及黄连解毒汤对t2dm大鼠血糖指标的影响。
  1 材料与方法
  1.1 药物
  黄连解毒汤组成药物均购于山东中医药大学附属医院。黄连解毒汤原方(黄连9 g,黄柏6 g,黄芩6 g,栀子9 g)由山东中医药大学附属医院制剂室水煎浓缩,每1 ml煎剂含有黄连解毒汤原药材1 g;盐酸二甲双胍片,0.25 g/片,山东力诺科峰制药有限公司,批号bc0188。
  1.2 试剂与仪器
  兔抗大鼠hif-1α抗体,北京博奥森公司,批号20130303;胰岛素酶免试剂盒,德国罗氏诊断有限公司,批号169839;链脲佐菌素(stz),美国sigma公司,批号b64927。全自动生化分析仪(日本olympus公司),低温自动平衡离心机(北京时代北利有限公司),电子分析天平fa1104型(上海天平仪器厂),石蜡切片机lkb-nova 5型(瑞士)。
  1.3 动物、分组与给药
  雄性wistar大鼠50只,spf级,体质量(200±20)g,山东中医药大学实验动物中心,动物许可证号:scxk(鲁)20110003。随机取出10只设为空白组,不予任何处理,普通饲料喂养。其余40只普通饲料喂养1周后给予stz 35 mg/kg腹腔注射。72 h后行葡萄糖耐量试验(ogtt),空腹血糖(fbg)≥7.8 mmol/l或血糖峰值≥16.7 mmol/l的大鼠为造模成功。共有30只大鼠符合上述条件。造模成功后的大鼠喂高糖高脂饲料(10%猪油、20%蔗糖、10%蛋黄粉、0.5%胆酸钠和59.5%普通饲料,北京科澳协力饲料有限公司提供)。随机将符合条件的大鼠分为模型组、对照组、治疗组,每组10只。空白组、模型组灌服等体积生理盐水,对照组每日给予0.135 mg/g二甲双胍灌胃,治疗组每日给予5.4 mg/g黄连解毒汤煎剂灌胃。大鼠用药剂量参照文献[3],每周测空腹体质量,根据体质量调整给药剂量,每2周测随机血糖。每日灌胃1次,连续6周。
  1.4 取材与检测指标
  所有大鼠6周后6%水合氯醛(0.5 ml/100 g)腹腔注射,麻醉,腹主动脉取血,分离血清。葡萄糖还原酶法检测fbg、酶免法检测空腹胰岛素(fins)、免疫组化法检测腹主动脉hif-1α、he染色观察腹主动脉血管形态。
  1.5 数据分析
  hif-1α阳性结果为棕黄色颗粒,主要在细胞核上表达,细胞浆内也有阳性着色。采用计数法,在高倍镜(×200)下每张切片随机取5个视野,计数每个视野里的细胞数及hif-1α阳性细胞数。如果阳性细胞数占计数总细胞的比值≤5%,则判定标本表达阴性。
  1.6 统计学方法
  采用spss17.0统计软件进行分析。数据以—x±s表示,采用t检验。p<0.01表示差异有统计学意义。
  2 结果
  2.1 黄连解毒汤对大鼠空腹血糖、胰岛素的影响
  模型组fbg、fins变化明显,与空白组比较差异有统计学意义(p<0.01),说明造模成功;对照组与治疗组fbg显著低于模型组,且治疗组与空白组比较差异无统计学意义;对照组fins与模型组比较差异无统计学意义,治疗组fins与模型组、对照组比较差异有统计学意义(p<0.01)。见表1。
  2.2 腹主动脉血管内皮he染色结果
  空白组:血管内膜光滑无增生,内皮细胞完整光滑,形状扁平,排列整齐。模型组:血管多数内皮细胞稍有饱满,排列不整齐;内膜可见高低不等增厚,内膜下较多空泡细胞,其间可见细胞浸润,脂质沉积。对照组:血管少量内皮细胞饱满,多数细胞扁平状,排列比较整齐,脂质沉积和浸润不明显,内膜轻度增厚。治疗组:内皮细胞绝大多数呈现正常的扁平状,偶见饱满状,脂质沉积和浸润不明显,细胞整体上排列整齐,内膜无增生。
  2.3 腹主动脉血管内皮缺氧诱导因子-1α免疫组化结果
  空白组基本检测不到hif-1α的表达;模型组hif-1α在细胞核上高度表达,细胞浆内也有阳性着色;对照组hif-1α阳性细胞数较模型组有所减少;治疗组hif-1α阳性细胞数明显减少。见图1。
  2.4 黄连解毒汤对大鼠腹主动脉血管内皮缺氧诱导因子-1α表达的影响
  空白组hif-1α基本无表达;与模型组比较,治疗组和对照组hif-1α明显下降,差异有统计学意义(p<0.01);与对照组比较,治疗组下降更明显,差异有统计学意义(p<0.01)。见表2。   3 讨论
  t2dm起病具有隐匿性、病程缓慢的特点,被认为是复杂的遗传因素和环境因素共同作用的结果。陆氏等[4]将其发病机制概括为4点:①遗传因素与环境因素;②胰岛素抵抗与胰岛素β细胞功能缺陷;③葡萄糖毒性和脂毒性;④自然史。虽然有以上4种发病机制作为参考,再加上历代医家的各种学说,但是到目前为止该病的具体发病机制尚不明确。目前胰岛素抵抗、胰岛β细胞分泌功能障碍被认为是2型糖尿病发病的两大重要因素[5]。现代医家在总结前人治疗消渴的基础上,通过对古代文献的认真研究并结合临床,提出糖尿病病机核心是"热毒"。过食辛辣油腻则加重脾胃运化负担,运化功能失调致使津液代谢失调,生成痰浊,痰浊郁久化热,成为热毒;七情失调,气郁化火成火毒,气滞血瘀成瘀毒;外感六淫侵犯人体,入里化热成热毒。毒邪入络,随血液运行遍及周身。毒邪侵袭上焦则见咳喘、胸痛,侵袭中焦则消谷善饥,侵袭下焦则水液失调发为水肿、癃闭。毒邪流注于足则发为坏疽,毒邪浸及体表则发为痈疽,毒邪入目络发为雀目。
  代氏等[6]研究表明,黄连解毒汤能显著降低正常小鼠、四氧嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖。陆氏等[7]研究发现,黄连解毒汤可以通过降低糖尿病大鼠体内炎性因子如肿瘤坏死因子-α、白细胞介素系列、c反应蛋白改善胰岛素抵抗,降低炎性因子,改善炎性因子对胰岛β细胞的损伤,从而达到治疗糖尿病的目的。肖氏等[8]通过观察黄连解毒汤对t2dm大鼠血清中一氧化氮、血浆内皮素、血管紧张素ⅱ的影响,发现黄连解毒汤组大鼠血清一氧化氮明显高于模型组,血管紧张素ⅱ显著低于模型组,说明黄连解毒汤可能通过其控制血糖、改善胰岛素抵抗、调节血脂代谢、抑制炎性因子的释放及扩张血管等作用来保护损伤的血管内皮。
  本实验结果显示,黄连解毒汤治疗组腹主动脉血管内皮细胞形态较模型组及对照组受损情况明显好转,内皮细胞无明显增生,治疗组fbg显著降低、fins显著升高,说明黄连解毒汤能有效控制血糖和升高fins水平。治疗组hif-1α蛋白表达水平显著低于模型组和对照组,说明黄连解毒汤能有效控制hif-1α蛋白表达,有可能是通过抑制hif-1α的蛋白表达来保护血管内皮及修复损伤的内皮细胞。
  以上结果说明,黄连解毒汤对t2dm大鼠血管内皮损伤有保护作用,其机制可能是通过控制血糖、控制hif-1α蛋白表达来调节内皮细胞功能,其抑制hif-1α蛋白表达的具体机制有待进一步深入研究。
  参考文献:
  [1] 黄贤珍,杨亦彬.缺氧诱导因子-1在糖尿病大鼠肾组织的表达及意义[j].湖北民族学院学报:医学版,2009,26(1):5-7.
  [2] 李立,汤永强.糖尿病大鼠视网膜缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子的表达[j].第四军医大学学报,2007,28(7):641-643.
  [3] 熊远珍.实验动物与人的用药量的新换算[j].江西中医学院院报, 1997,10(4):41
  [4] 陆再英,钟南山.内科学[m].7版.北京:人民卫生出版社,2008:644-664.
  [5] 李延兵,朱大龙,田浩明,等.新诊断2 型糖尿病患者b细胞功能分析[j].中华医学杂志,2006,86(36):2537-2541.
  [6] 代培良,于得海.黄连解毒汤降血糖作用的实验研究[j].河南中医学院学报,2004,19(2):36-37.
  [7] 陆付耳,徐丽君,冷三华,等.黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠血清炎性介质和标志物水平的影响[j].中国医院药学杂志,2005,25(12):1113- 1115.
  [8] 肖雁凌,陆付耳,徐丽君,等.黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠血管内皮功能的影响[j].中国中药杂志,2005,30(22):1767-1770.


黄连解毒对于糖尿病大鼠血糖主动脉血管内皮形态



  • 微信
  • QQ好友
  • QQ空间
  • 新浪微博

系统推荐

玉烛散加减配合针刺治疗功能性下丘脑性闭经疗效观察

关键词:功能性下丘脑性闭经;玉烛散;针刺疗法   中图分类号:r271.91 文献标识码:a 文章 ...

吴茱萸挥发油、芥子油及大黄总蒽醌对芍药苷体外经皮渗透的影响

摘要:目的 考察吴茱萸挥发油、芥子油、大黄总蒽醌作为促渗剂对芍药苷经皮渗透的影响。方法 采用yb- ...

寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜组织α—烯醇化酶表达的影响

摘要:目的 通过观察寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜组织α-烯醇化酶表达的影响,探讨其安胎的作用机制。方 ...

类风湿关节炎患者雷公藤甲素血清浓度测定及其药动学研究

摘要:目的 建立滋阴明目片的质量标准。方法 采用薄层色谱法对滋阴明目片中的牡丹皮、山萸肉、羌活、石 ...

HPLC测定增液承气口服液中梓醇含量

摘要:目的 建立增液承气口服液中梓醇的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为eclips ...

加速溶剂萃取法测定大枣中有机氯及拟除虫菊酯类农药残留量

摘要:目的 建立快速同时测定大枣中50种有机氯及拟除虫菊酯农药残留的气相色谱测定方法。方法 样品用 ...

HPLC测定肝泰舒胶囊中獐牙菜苦苷含量

摘要:目的 建立高效液相色谱方法测定肝泰舒胶囊中獐牙菜苦苷含量的方法。方法 采用waters sy ...

五子补肾胶囊成型工艺研究

摘要:目的 探讨五子补肾胶囊的成型工艺。方法 以吸湿率为指标考察辅料的种类和配比,并考察颗粒的休止 ...

不同纯度高良姜素对A375—HaCaT共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响

摘要:目的 研究不同纯度高良姜素对人黑色素瘤细胞-人永生化角质形成细胞(a375-hacat)共培 ...

不同工艺提取的竹节参皂苷粗提物毒性及其抗炎作用初步研究

摘要:目的 比较不同工艺提取的竹节参皂苷粗提物的毒性及抗炎效果。方法 采用不同工艺分别制备竹节参皂 ...

湖南省中医药在医药卫生体制改革中的作用分析

摘要:目的 通过中医药发展对基层卫生机构业务量、居民医疗服务需求、医疗服务费用水平的影响分析,明确 ...

黄芪甲苷对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

摘要:目的 观察黄芪甲苷对大鼠心肌细胞线粒体的保护作用及其抗心肌细胞凋亡的作用,探讨其治疗心力衰竭 ...

芦荟全叶冻干粉的一般药理学实验研究

摘要:目的 观察芦荟全叶冻干粉对实验动物心血管系统、中枢神经系统和呼吸系统的影响,探讨其一般药理作 ...

脑卒中高危人群中医症状及舌脉特点分析

摘要:目的 初步探讨脑卒中高危人群的中医症状及舌脉特点,为脑卒中的中医预防提供辨证论治依据,并为脑 ...

浅议数学教学中学困生的转化问题

初中数学学困生的形成主要表现在以下几个方面:对数学基本概念、公式、定理模糊,不能准确地用数学语言进 ...

浅谈高中历史教学中的情感教育与学习动机教育

高中历史教学中的情感教育与学习动机教育,是一项长期的教育任务。实践证明,只有认真加强教学中的情感教 ...

浅谈影响中学生成才观形成的因素及对策

我国社会经历了伟大的变革,已进入一个崭新的时代。树立什么样的成才观,既关系到这个伟大时代的盛衰 , ...

初中化学教学成绩的提高刍议

在教学实践过程中,如何将教师的主导作用与学生的主体性有机结合起来,从而进一步提高教学质量,发展学生 ...

政治教学中如何培养学生的自我认识能力之我见

自我认识能力的培养是实施素质教育的一个重要课题。它主要是以发掘人的自我认识能力,弘扬人的主体精神, ...

提高生物课堂教学效果的有效途径

生物教学要把素质教育落到实处,我们教师就得改进教学方法,培养创新的能力。新课程标准既要求教师的观念 ...


版权所有:阅文网 www.13meiwen.com

免责声明:本网站信息来源于网络,免费共享,仅供学习和研究使用,版权和著作权归原作者所有,如有侵权,请通知我们删除信息。

      浙ICP备19022628号-16

返回顶部